手把手教你如何玩转分光光度法
阅读：108发布时间：2022-10-14
分光光度计是利用分光光度法，通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。根据分光元件的不同，分为棱镜式和光栅式分光光度计；根据仪器结构分为单光束、准双光束、双光束和双波长分光光度计；根据光源发射的光线波长不同分为可见光、紫外-可见光、红外、荧光、原子吸收光和火焰分光光度计等。
一、分光光度法的特点：
有色物质对光的吸收具有选择性。它呈现的颜色与被吸收的光线的颜色互为补色，如果要确定某种溶液选择吸收的特定波长一般可以先用UV扫一下，确定zui大波长，也可以根据实际试样通过查文献来确定zui大波长。
对任何一种有色溶剂，都可以测定出它的吸收光谱，UV的分光精度越高，作出的光吸收曲线的精度越高，光吸收程度zui大处的波长也就是zui大吸收波长。溶液浓度不同时，光吸收曲线的形状相同，其zui大吸收波长不变，只是吸光度大小不同。我们在测定时一般用zui大吸收波长作为测定波长。如图1所示：不同浓度溶液的吸光度不同，但是zui大吸收波长都是在525nm。
另外，吸光度具有加合性，在某一入射波长下，溶液中含有多种对光产生吸收的物质，那么该溶液对该波长光的吸光度A总应等于溶液中每一种成分的吸光度之和。这一性质对多组分的测定极为有利。
二、分光光度法应用领域：
高含量组分测定-示差法当待测组分含量较高时，测得的吸光度值常常偏离朗伯-比尔定律。即使不发生偏离，也因为通常采用纯溶剂作参比溶液（普通光度法），使测得的吸光度太高，超出适宜的读数范围而引入较大的误差。采用示差法就能克服这一缺点。但应用示差法时，要求仪器光源有足够的发射强度或能增大光电流放大倍数，以便能调节参比溶液透光度为99%。这就要求仪器单色器质量高，电光学系统稳定性好。
多组分分析应用紫外可见分光光度法，常常可能在同一试样溶液中不进行分离而测定一个以上组分。假定溶液中同时存在两种组分x和y，其吸收光谱一般有重叠和不重叠两种情况。不重叠的测定组分相互不产生干扰。若吸收光谱重叠，在波长为λ1和λ2时分别测定吸光度A1和A2，由吸光度值的加和性得到联立方程，通过解联立方程求得各浓度值。
三、分光光度法的一般检测项：
（1）仪器灵敏度的检查。配置含铬10mg/l重铬酸钾溶液，在440nm下以水作为参比溶液，测其吸光度不得＜0.01。
（2）仪器重复性的检查。在相同的工作条件下用同一溶液重复测量，其百分透光率读数zui大误差不得超过0.5。
（3）波长准确度的校验。当仪器使用一段时间后，必须对波长读数进行校正。
（4）更换灯泡。换灯泡时要戴手套，换后要仔细上下调正其位置，使其光斑聚焦在入射狭缝正中处。
