进口ELISA试剂盒操作步骤

猴间羟肾上腺素(MN)ELISA试剂盒  

酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种灵敏、特异的免疫学技术，用于检测抗原或抗体的存在。其基本原理是将抗原或抗体与酶结合，形成酶标抗原或抗体，保留其免疫活性，同时又保留酶的活性。然后将酶标抗原或抗体与固相载体表面结合，形成酶-抗原-抗体复合物。最后通过底物显色反应，根据颜色变化来检测抗原或抗体的存在。ELISA具有高灵敏度、高特异性、快速、易操作等优点，在医学、生物领域得到广泛应用。

试剂盒性能

 检测范围：5 pg/mL – 160 pg/mL。

 灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

实验步骤

1. 准备试剂盒：将试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟以上，使试剂盒恢复至室温。

2. 加样：分别向各孔中加入标准品、待测样本和空白孔，每孔加入50μl。

3. 孵育：用封板胶纸封住反应孔，轻轻振荡混匀，37℃孵育1小时。

4. 洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液充分洗涤4-5次，每次30秒。

5. 加酶标二抗：每孔加入50μl酶标二抗溶液，轻轻振荡混匀，37℃孵育30分钟。

6. 洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液充分洗涤4-5次，每次30秒。

7. 加底物：每孔加入50μl底物溶液，轻轻振荡混匀，37℃孵育15-20分钟。

8. 终止反应：每孔加入50μl终止液，轻轻振荡混匀。

9. 读数：用酶标仪在450nm波长处读取各孔的光密度值。

操作注意事项

1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3. 浓度为 0 的标准品可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，终结果乘以5才是样本终浓度。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

6. 若中英文说明书有误，请以中文说明书为准。

7. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。

8. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

猴间羟肾上腺素(MN)ELISA试剂盒 

洗板方法

1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5次。

2.自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

结果判断:

1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 

ELISA试剂盒的作用

ELISA试剂盒是一种用于体外定性检测人血清或血浆中的特定抗体的试剂盒，例如抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒。

ELISA试剂盒基于抗原抗体之间的特异结合反应，以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体，而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。

ELISA试剂盒具有灵敏度高、特异性好、操作简便、安全、快速等优点，可以用于检测类风湿因子、病毒、细菌等，在临床诊断、科研和生物制品检测等领域具有广泛的应用。

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